密度梯度離心是分子的分離,其中分離基于分子在離心力下通過密度梯度時的分子密度。
密度梯度離心原理
-
密度梯度離心基于以下原理:分子在離心力作用下沉降直至到達(dá)密度與它們相同的介質(zhì)。
-
在這種情況下,使用具有密度梯度的介質(zhì),該介質(zhì)必須減小密度或增大密度。
-
當(dāng)樣品旋轉(zhuǎn)時,樣品中的分子會穿過介質(zhì),從而產(chǎn)生離心力。
-
當(dāng)密度更高的分子通過密度梯度時,它們開始向底部移動。
-
然后,分子在顆粒密度等于周圍介質(zhì)的點(diǎn)處懸浮。
-
以這種方式,具有不同密度的分子在不同的層上分離,然后可以通過各種方法進(jìn)行回收。
密度梯度離心的步驟
-
通過在離心管中輕輕放置較低濃度到較高濃度來創(chuàng)建介質(zhì)的密度梯度。
-
然后將樣品放置在梯度上方,并將試管放置在超速離心機(jī)中。
-
粒子穿過梯度,直到達(dá)到其密度與周圍介質(zhì)的密度匹配的點(diǎn)。
-
除去和分離級分,獲得作為分離單元的顆粒。
密度梯度離心的用途
-
密度梯度離心可用于純化大量生物分子。
-
它甚至可以用于純化不同的病毒,這有助于進(jìn)一步研究。
-
該技術(shù)既可以用作分離技術(shù),又可以用于確定各種粒子的密度的技術(shù)。
密度梯度離心的例子
-
該方法用于著名的實(shí)驗中,通過使用不同的氮同位素證明DNA是半保守的。
-
另一個例子是使用該技術(shù)從肌肉勻漿中分離微粒體級分并隨后分離具有不同密度的膜囊泡。