差速離心是一種離心過(guò)程,其中通過(guò)施加一系列增加的離心力將組分分別沉降到離心管中。
差速離心原理
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差異離心是基于不同大小和密度的生物顆粒沉降速率的差異。
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當(dāng)施加增加的離心力時(shí),較大分子的初始沉淀發(fā)生。
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取決于單獨(dú)離心步驟的速度和時(shí)間以及顆粒的密度和相對(duì)尺寸,其他顆粒沉降下來(lái)。
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zui大種類(lèi)的顆粒在離心管底部形成沉淀,在上清液中留下較小尺寸的結(jié)構(gòu)。
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因此,較大的分子以較低的離心力快速沉降,而較小的分子則需要較長(zhǎng)的時(shí)間和較高的力。
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如果顆粒的密度小于介質(zhì)密度,則顆粒將漂浮而不是沉降。
差速離心的步驟
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將樣品溶液在含有緩沖液的培養(yǎng)基中勻漿。
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然后將樣品放入離心管中,該離心管在特定溫度下以特定離心力運(yùn)行特定時(shí)間。
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在該操作結(jié)束時(shí),將在管的底部形成沉淀,將其與上清液分離。
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將上清液添加到新的離心管中,在該離心管中以另一種速度離心特定的時(shí)間和溫度。
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再次,將上清液與形成的沉淀分離。
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繼續(xù)這些步驟,直到所有顆粒彼此分離。
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然后可以通過(guò)測(cè)試特定顆粒**的指示劑來(lái)識(shí)別顆粒。
差速離心的用途
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差速離心通常用于分離細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞器和細(xì)胞膜。
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它還可以用于核的低分辨率分離。
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由于此技術(shù)可根據(jù)顆粒大小分離顆粒,因此可用于純化含有較大尺寸雜質(zhì)的提取物。