分析離心是一種分離方法,其中樣品中的顆粒根據(jù)其密度和所經(jīng)歷的離心力進(jìn)行分離。分析超速離心(AUC)是一種用于定量分析溶液中大分子的通用且可靠的方法。
分析離心原理
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分析離心是基于這樣的原理,即比其他顆粒更稠密的顆粒沉降得更快。同樣,較大的分子在離心力作用下比較小的分子運(yùn)動(dòng)更快。
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用于確定大分子的相對(duì)分子質(zhì)量的分析超離心可以通過沉降速度方法或沉降平衡方法進(jìn)行。
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大分子的水動(dòng)力特性通過其沉降系數(shù)來描述。它們可以根據(jù)特定生物分子的濃度邊界在重力場中移動(dòng)的速率來確定。
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沉降系數(shù)可用于表征隨著實(shí)驗(yàn)條件的變化大分子的尺寸和形狀的變化。
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三種光學(xué)系統(tǒng)可用于分析型超速離心機(jī)(吸光度,干涉和熒光),可以實(shí)時(shí)精確,選擇性地觀察沉淀。
分析離心的步驟
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將少量樣品(20-120 mm 3)放入分析池中,放置在超速離心機(jī)內(nèi)。
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然后操作超速離心機(jī),使得離心力引起隨機(jī)分布的生物分子從旋轉(zhuǎn)中心徑向向外遷移穿過溶劑。
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分子距中心的距離是通過Schlieren光學(xué)系統(tǒng)確定的。
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從溶質(zhì)濃度對(duì)距旋轉(zhuǎn)中心的徑向距離的平方繪制圖,據(jù)此確定分子質(zhì)量。
分析離心的用途
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分析離心可用于測定大分子的純度。
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它也可以用于檢查超分子復(fù)合物分子量的變化。
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此外,它可以確定天然狀態(tài)下的溶質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。