更快，更準(zhǔn)確的外來(lái)體分析

使用外來(lái)體的研究人員的挑戰(zhàn)包括手動(dòng)設(shè)置密度梯度，因?yàn)樗欠ξ叮臅r(shí)，并受用戶，實(shí)驗(yàn)室和方法變異性的影響。還需要更大的尺寸和濃度分析的準(zhǔn)確性。與此同時(shí)，該*域的**呼吁建立標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議。1我們通過(guò)成本效益，大規(guī)模純化和快速分析外來(lái)體來(lái)為這些挑戰(zhàn)提供解決方案。具體來(lái)說(shuō)，Biomek 4000工作站有助于克服人為變量，并為梯度設(shè)置提供一致，可重復(fù)，高通量的方法，代表了擴(kuò)大問(wèn)題的突破性解決方案。Optima超速離心系統(tǒng)幫助研究人員保持運(yùn)行之間的可靠性，使結(jié)果高度可重現(xiàn)。

雖然科學(xué)家已經(jīng)知道胞外囊?guī)资辏?*近才有技術(shù)能夠區(qū)分外來(lái)體與微泡和凋亡體。膜囊泡的分類 - 以及它們分離的**合適和有效的方案 - 仍然是研究的強(qiáng)烈*域。當(dāng)隔離囊泡時(shí)，使用能夠分離囊泡的系統(tǒng)是**關(guān)重要的，以避免交叉污染。同時(shí)，需要增加尺寸和濃度準(zhǔn)確度，以及增強(qiáng)工作流程。外來(lái)體是幾乎所有細(xì)胞類型釋放的膜囊泡（直徑約30-120nm）。2,3它們可以在血漿和其他體液中自由獲得，并含有蛋白質(zhì)，mRNA和miRNA，代表它們分泌的細(xì)胞。如圖4所示，5 外來(lái)體作為診斷以及治療生物標(biāo)志物已成為焦點(diǎn)。另外，外切體已經(jīng)顯示為細(xì)胞間通訊功能的一部分，對(duì)抗腫瘤和促腫瘤活性都有影響。6先前的工作已經(jīng)提供了深入了解使用密度梯度超速離心，外來(lái)體的隔離2,7雖然有是獲得純化后的大小和濃度的更具體的確認(rèn)的一種努力。

Beckman Coulter提供涵蓋整個(gè)外來(lái)體工作流程的產(chǎn)品，使用自動(dòng)化，離心和動(dòng)態(tài)光散射（DLS）來(lái)純化和分析外來(lái)體樣品。Biomek 4000實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化工作站幫助克服了人的變數(shù)，并為密度梯度設(shè)置提供了一致，可重復(fù)，高通量的方法 - 擴(kuò)大障礙的優(yōu)雅解決方案。制備性超速離心有助于保持運(yùn)行之間的可靠性和高重現(xiàn)性。重要的是，使用Optima MAX-XP和Optima XPN的制備性超速離心達(dá)到將生物大分子樣品及時(shí)分離到其密度梯度的等密度點(diǎn)所需的g力。DelsaMax CORE DLS平臺(tái)用于級(jí)分的尺寸分析，因?yàn)橥鈦?lái)體顆粒可以是：（1）在溶液中分析，（2）具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（3）與電子顯微鏡相比具有更少的成本和時(shí)間。而不是花幾個(gè)小時(shí)來(lái)分析幾百個(gè)粒子，DelsaMax核心能夠在一分鐘內(nèi)分析和確定數(shù)千個(gè)外來(lái)體。

整個(gè)外來(lái)體制備工作流程概述如下。

步驟1-以對(duì)數(shù)期細(xì)胞密度-1×10 5細(xì)胞/ mL生長(zhǎng)的Jurkat細(xì)胞

步驟2--臺(tái)式離心機(jī)（Allegra X-15R）以除去細(xì)胞和細(xì)胞碎片/

步驟3-高速離心機(jī)（Optima XPN）以除去較小的細(xì)胞碎片。

步驟4-高速離心機(jī)（Optima XPN）沉淀外來(lái)體。

步驟5 - Biomek 4000工作站設(shè)置密度梯度

步驟6-密度梯度超速離心（Optima XPN）以從共純化的蛋白質(zhì)和其他酵母囊泡分離外來(lái)體。

步驟7-高速離心機(jī)（Optima MAX-XP）將溶劑從碘克沙醇和蔗糖交換為磷酸鹽緩沖鹽水

步驟8-DelsaMax CORE用于尺寸測(cè)定和分析

參考文獻(xiàn)

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